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液相色譜柱的使用注意事項及再生

1 、色譜柱的使用說明：
（ 1 ）、 色譜柱使用前注意事項：
色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用 10 ％左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。
（ 2 ）、 流動相：
流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過 0.45μm 的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的 PH 值適用范圍是 2.0-8.0 ， BDS C18 適合于堿性化合物， PH 值適用范圍為 2.0-10.0 。當必須要在 PH 值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來所使用的流動相。
（ 3 ）、 樣品：
樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱（ SPE ）對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。
2 、色譜柱的保存
（ 1 ）、 反相色譜柱每天實驗后的保養：
使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗 30 分鐘。 注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入 10% 的甲醇，防止將填料沖塌陷。
（ 2 ）、 長期保存色譜柱：
如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑*或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。
3 、色譜柱的再生
因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說可能是柱效下降。
（ 1 ）、 反相柱的再生 ： 依次采用 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇：水 =10 ： 90 （ V/V ），乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
（ 2 ）、 正相柱的再生 ： 依次以 20-30 倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。
4 、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法
色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高（系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外），可能的原因有如下幾點：
（ 1 ）、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；
（ 2 ）、色譜柱頭的填料被樣品污染；
（ 3 ）、色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出；
（ 4 ）、流動相 PH 值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。
解決辦法如下：
（ 1 ）、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在 10 ％的稀硝酸內超聲清洗 10 分鐘，后再用純水超聲 10 分鐘，重新裝入色譜柱。
（ 2 ）、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
（ 3 ）、如確定定是鹽結晶，用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
（ 4 ）、如果因 PH 值使用不當，很難恢復。
 
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